黑皮鸡枞菌工厂化生产关键技术
叶雷 刘定权 赵建龙 李小林
四川省农业科学院土壤肥料研究所
四川乌蒙山四季菌业有限责任公司
《南方农业》2019年31期
摘 要
简介 黑皮鸡枞生物学特性，以及工厂化液体菌种制备、工厂化制袋及接种、发菌及菌丝后熟管理等技术要点。从覆土材料选择及预处理，设施厂房层架排袋，出菇管理及病虫害防控，采收和贮运几个方面阐述了从生产实践中总结提炼出的工厂化出菇关键技术。
关键词 黑皮鸡枞；工厂化生产；关键技术
黑皮鸡枞菌是四川近几年得以快速发展的人工可栽培珍稀菌类之一，其子实体富含多糖、氨基酸和微量元素等，可生食，同时菌丝体发酵物和子实体含长根菇素（小奥德黄酮），具有抑制霉菌等生长和降低人体血压的作用。四川省农业科学院土壤肥料研究所早在2000年就选育出了黑皮鸡枞新品种[1]，对该类菌株的碳源、氮源、酸碱度、温度等栽培特性进行了全面研究[2-3]，并在德阳、广元和成都等地推广应用，至今每年都有小规模的农法栽培。随着科技的进步，工厂化生产成为食用菌产业发展的新方向。本文系对黑皮鸡枞工厂化生产关键技术的总结提炼。
1 生物学特性
黑皮鸡枞菌（Oudemansiella radicata），又名长根金钱菌、露水鸡枞、长根小奥德蘑等[4]，属中偏高温型菇类，为担子菌亚门（Basidiomycotina）、伞菌目（Agaricales）、白蘑科（Tricholomataceae）、小奥德蘑属（Oudemansiella）的腐生菌[5]，野生种在四川、云南、广西、河南和安徽等地有分布。其菌丝体喜pH值5.5～6.5的微酸性环境[6]，菌丝体生长温度5～35℃，最适温度18～25℃；子实体发生及发育的温度15～32℃，最适出菇温度22～27℃；菌丝有后熟特性，一般要经过30～40d的生理成熟期；喜覆土出菇，但不覆土也可少量出菇。
2 工厂化液体菌种制备
2.1 母种制作
母种制作多选用固体斜面培养基或固体平板进行，常用培养基配方为：1）马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，pH自然，加水至1L[7]；2）马铃薯180～210g，麦麸25～30g，葡萄糖15～20g，磷酸二氢钾1～3g，硫酸镁0.5～1.0g，维生素B15～10mg，琼脂18～22g，pH值5.5～7.0，加水至1L。
培养基制作按照常规方法进行。生产用菌种应选择无杂菌、纯度高、活力强的菌株。长期不用的菌种应采用蒸馏水法、液氮保存法等方式进行低温保存。
2.2 液体菌种制备
2.2.1 一级摇瓶菌种制备
多采用容量1L的三角瓶进行，其部分液体培养基如下：1）玉米粉2～4g，酵母膏3～4g，蔗糖18～22g，磷酸二氢钾0.2～0.5g，七水硫酸镁0.5～1.0g，维生素B18～12mg，消泡剂（聚二甲基硅氧烷乳液）0.2～0.4mL，轻质碳酸钙适量，pH值调整至6.5左右，加水至1L。2）豆粕粉3～7g，葡萄糖15～25g，磷酸二氢钾0.5～1.0g，七水硫酸镁0.5～1.0g，维生素B18～12mg，消泡剂（聚二甲基硅氧烷乳液）0.2～0.4mL，轻质碳酸钙适量，pH值调整至6.5左右，加水至1L。
按照配方组分配制液体，在磁力搅拌器上加热搅拌后分装在容量为1L的三角瓶中，液体装量为三角瓶容量的45%以下，盖好硅胶瓶塞，放在高压灭菌锅中按照张伟[8]所述的方法进行灭菌后，取出培养基放置在干净的超净工作台上冷却。
待液体温度冷却至28℃以下即可开展接种，整个接种过程采用无菌操作流程，将固体培养基上的菌丝体用接种工具划为3～5mm×3～5mm×0.1～0.2mm的接种块，接种量控制在5～20块/瓶，然后将接种块转移到液体培养基中，瓶口用无菌硅胶塞盖紧，然后放置在黑暗的摇床上摇瓶培养。
摇床参数：温度22～25℃，湿度自然，无光，转速90～160r/min。一般培养6～7d，质量检测合格后即可用于后续深层发酵接种。对不能及时使用的菌种，可先暂时存放在4℃冰箱，但是不能长时间存放。
2.2.2 液体菌种培养罐深层发酵
采用专业的食用菌液体菌种深层发酵培养罐进行液体菌种扩繁。所用液体培养基配方与一级摇瓶菌种用液体一致，按照组分进行扩大配制，采用成套设备对液体培养基进行灭菌并冷却到28℃以下，用无菌方式将培养基导入深层发酵培养罐，并对液体进行合格检测，对合格液体按照无菌操作流程将上述一级摇瓶菌种接入一级发酵罐中，一般1～3瓶接种1罐（100L液体），且将接种后的三角瓶残液在超净台内接入肉汤培养基和PDA斜面试管等，置于(37±1)℃培养，16～48h后观察是否有杂菌生长，有条件可进行显微镜染色检测。
设置培养罐参数：控制罐压0.02～0.05MPa，转动频率25～30Hz，温度25℃，根据罐体中菌丝量适当调整通气量，液体与通气比一般为1∶(0.2～0.5)。
一级发酵罐一般培养(5±1)d可达到菌丝体积占比8%以上的接种浓度，即可用于二级深层发酵罐（一般选择1000L或者1500L的罐）接种，接种量10%左右；二级罐参数按照一级罐相同设置，一般培养4d即可达到接种浓度，用于料袋接种。
3 工厂化制袋及接种
黑皮鸡枞生产均采用袋料栽培，采用工厂化专业机械进行拌料、装袋、灭菌、接种等。部分主要生产配方如下：
1）杂木屑75～78份，麦麸(或米糠)12～15份，玉米粉6～8份，过磷酸钙1份，石膏粉1份，石灰2份；
2）棉籽壳78～82份，麦麸(或米糠)10～12份，玉米粉5～8份，蔗糖1份，过磷酸钙1份，石膏粉1份，石灰2份；
3）杂木屑60～65份，玉米芯15～20份，麸皮（或米糠）15～18份，蔗糖1份，石膏粉1份，石灰3份；
4）棉籽壳50～60份，木屑25～35份，米糠10～13份，石膏1份，过磷酸钙1份，石灰3份；
5）棉籽壳78～82份，豆粕5～8份，玉米芯10～15份，玉米粉2.5～3份，过磷酸钙1份，石膏粉1份，石灰2.5份。
按照配方称取各种原料，先将主料干拌均匀，再加入其他辅料混合，并调节基质水份至55%～65%（重量比）。一般采用规格15cm×33cm×0.004cm的聚丙烯料袋装料，重量约1.15～1.25kg/袋，料袋可选用套环或窝口方式进行生产。装袋完毕后，进行高压灭菌，维持温度125℃、2h，自然冷却4～8h，趁热出锅，放置在经消毒处理的冷却室，采用降温设备对料袋进行降温，使得袋料中部温度在28℃以下即可开展接种工作。料袋接种采用专业接种机械（见图1）进行，控制接种量为液体菌种25～30g/袋。
图1 液体接种机
4 发菌及菌丝后熟管理
培养房须提前3～7d清洗消毒，接种的料袋移入后，控制环境温度(22±3)℃，空气相对湿度75%左右，黑暗无光，适当通风换气。菌袋培养过程中，尽量减少人为走动，避免人为因素影响发菌效果，还要定期清理杂菌污染袋。控温培养条件下，30d左右菌丝即可满袋，但是满袋后不能急忙用于出菇，应继续低温培养菌袋，将环境温度调控至(13±2)℃，约维持20～30d，当基料表面出现黑褐色条纹或出现凸起原基时，即可结束培养，转入出菇环节。
5 工厂化出菇关键技术
5.1 覆土材料选择及预处理
5.1.1 覆土材料选择
黑皮鸡枞覆土出菇是最理想的出菇方式，可大大提高出菇单产。所选覆土材料可为土壤、泥炭土、珍珠岩、腐殖质等，为了方便一般选用土壤进行覆土，所选土壤要求质地疏松，透气性好，有机质含量丰富，以沙壤土为最佳。
5.1.2 覆土材料预处理
覆土前5d左右，将沙壤土撒布石灰粉和喷施高效绿霉净进行拌匀消毒，控制含水量在30%左右，pH值为8～10，然后闷堆并用薄膜覆盖2～3d，使用前一天测定土壤酸碱度，调整pH值为7.0～7.5，即可用于后续覆土或垫土。
5.2 设施厂房层架排袋
黑皮鸡枞工厂化出菇均采用层架式（见图2）出菇，其目的是提高单产，一般分为3～6层，单层层架长30～40m，每层放置2000～2500个菌包，一个出菇房放置1.2万～1.8万个菌包。在准备用于出菇前3～5d，用防霉、防虫药剂对菇房出菇层架、地面、墙体等进行消毒处理，然后再摆袋出菇。根据栽培出菇是否脱袋，分为脱袋出菇和袋内出菇两种。
图2 出菇层架
5.2.1 脱袋出菇
是一种将菌袋的塑料袋人工去除，再进行覆土出菇的一种方式，因该种方法可增加出菇面积，间接提高出菇产量，是四川地区的主要栽培方式。
首先在出菇房中的洁净层流罩下方采用无菌刀片将菌丝生理成熟了的菌袋表面聚丙烯料袋脱下，将菌棒放置在消毒处理了的塑料托盘中，装满后用平板拖车转移至出菇种植架，采用机械臂或者人工将菌棒排列在底部铺有约5cm厚经处理过的土壤上，垂直放立一般一排排列9个（菌棒间距3cm左右），使得整个脱袋菌棒铺满种植床架，然后将覆土土壤填满菌棒间隙，并覆盖约5cm厚的土壤（见图3）。待后续出菇管理。
图3 脱袋层架覆土栽培
5.2.2 袋内出菇
是一种不用脱去菌袋的塑料袋而直接在菌袋一端开口进行覆土出菇的方式，该方式过程简单，处理废弃菌渣容易，但由于出菇面积相对较小，单产相对于脱袋覆土略低。将菌丝生理成熟了的菌袋一端开口，用处理过的土壤覆盖约5cm厚，将开口菌袋垂直均匀地摆放在出菇房的床架上。待后续出菇管理。
5.3 出菇管理及病虫害防控
无论是脱袋出菇还是袋内出菇，在工厂化出菇房中完成菌袋覆土后，都须对覆土进行浇水，所用水均为澄清石灰水（pH值7.0～7.5）；维持土壤含水量约25%左右，土壤温度23～27℃，空气相对湿度80%以上，1500～2000lx光照，注意通风，15～25d即可出现大量原基，原基长出后，要增加喷水次数，以细喷多次为原则，且宜在早晚喷。菇蕾继续生长5～10d，八分熟以前采收，采收完一茬停水养菌约5d进入下一潮菇的管理。
在出菇期病虫害防控上，以预防为主，在出菇房中放适量黄板、杀虫灯、诱杀剂等，发现病虫害立即隔离处理，如出现黏菌（见图4左）等为害，可在其发生区撒入适量生石灰，营造强碱性环境加以控制；跳虫（见图4右）体表为油质，药液很难渗入体内，应以预防为主，多在出菇房放置黄板，在出菇前对菇房进行熏蒸消毒。
图4 黏菌为害(左)和跳虫啃食子实体(右)
5.4 采收和贮运
当菌盖开伞5～8成时即判定子实体可采收。采收时单手握住菌柄，轻轻向上旋转拉出整个子实体，然后均匀放置在洁净的托盘中，采收后立即放置在4℃冷却室中预冷，再立即用小刀削去菌柄基部泥土及其“根”，再进一步进行分级。
图5 成熟的黑皮鸡枞菌
分级完成的菇按照一定重量规格打包进行冷链鲜销，保藏库温度0～4.0℃，无光，空气相对湿度80％左右，一般保鲜期可达8～10d。目前，四川省已在叙永县麻城镇建成食用菌工厂化生产基地，产品在本省销售，同时远销北京、广东、上海、重庆等市场，供不应求，市场前景广阔。
参考文献：
[1] 谭伟,郑林用,彭卫红,等.食用菌人工驯化新品种——露水鸡枞选育研究[J].西南农业学报,2002,15(2):24-27.
[2] 谭伟,郑林用.六种碳源和氮源对长根奥德蘑菌丝生长的影响[J].西南农业学报,2001,14(3):109-111.
[3] 谭伟.长根金钱菌生物学特性研究[J].食用菌学报,2001,8(3):16-22.
[4] 陈建飞,程萱,周爱珠,等.长根菇化学成分及药理作用研究进展[J].食药用菌,2018,26(4):222-224.
[5] 顾新伟,何伯伟,郑巧平,等.浙南山区大型真菌[M].杭州:浙江科学技术出版社,2012.
[6] 邹祥,胡昌华.长根菇液体深层发酵条件的研究[J].食品科学,2005,26(2):130-134.
[7] 叶雷,付雨,邹捷,等.四川3种商业块菌内生真菌的分离及鉴定[J].中国农学通报,2018,34(24):57-63.
[8] 谭伟,张伟.长根奥德蘑菌种培养基筛选试验[J].西南农业学报,2001,14(S1):127-129.
