正红菇母种最适培养基的筛选程
海涛 张跃华 翟登攀 罗志文*
（佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007）《食用菌》2012.3
摘要 采用不同的培养基配方对正红菇母种进行培养试验，同时设计了5种不同配方的培养基进行对比试验，CPDA培养基比较适合于正红菇的母种培养，小麦琼脂培养基比较适合于正红菇的菌种保藏。
关键词 培养基 对比 正红菇
正红菇[Russula vinosa Lindblad]为伞菌目（Agarica Les）红菇属（Russula）大型真菌，是我国北方一种食药兼用的经济真菌[1]。正红菇子实体无毒，并含有多种蛋白、氨基酸、多糖、微量元素等。研究发现，正红菇具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫力的活性成分[2]。正红菇在我国分布于广东、四川、福建，以闽西北地区多产，黑龙江省东部林区有少量分布，粗多糖取物抗癌率较高，对多种病原菌有较强的抵抗作用[3]。
试验对正红菇进行母种组织块分离试验，采用5种不同培养基进行对比，筛选适合正红菇菌种培养和菌种保藏的培养配方，为正红菇多糖的提取、分离奠定了研究基础。
1 材料与方法
1.1 供试菌株 供试正红菇母种购自中国林业科学院生态研究所菌种保藏中心，现保存于佳木斯大学生命科学学院微生物试验室冰箱中。2011年3月初笔者对购买的正红菇母种进行活化培养，母种采用PDA培养基培养，接种后，经5d的活化培养后进行后续试验。
1.2 供试培养基及制备
① 马铃薯培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然[4]。
马铃薯洗净去外皮，用刀切成3mm厚的片，称200g，加水至1000mL，煮沸20~30min，4层纱布过滤，备用。取滤液放于烧杯中，加入琼脂粉并改为小火加热，用玻璃棒适时搅拌，至琼脂溶化后过滤，倒入1000mL锥形瓶中，加葡萄糖，加水至1000mL。塞入棉塞，用牛皮纸和线绳扎好。取9cm培养皿用牛皮纸或报纸包好，同上述培养基的锥形瓶一起放入高压灭菌锅内。在120℃恒温高压0.098~0.118MPa（1.0~1.2kg/cm2）灭菌25~30min，无菌条件下倒平板，待用。
② 综合马铃薯培养基（CPDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，KH4PO43.0g，（NH4）2SO4·7H4O1.5g，维生素B1 10mg，琼脂粉25g，加水至1000mL，pH自然[5]。在120℃高压蒸汽灭菌30min，倒平板，待用。
③ 玉米粉综合培养基：玉米粉30g，葡萄糖20g，KH4PO41.0g，（NH4）2SO4·7H4O0.5g，蛋白胨1.0g，琼脂粉20g，加水至1000mL，pH自然[6]。在120℃高压蒸汽灭菌30min，无菌条件下倒平板，待用。
④ 马铃薯蔗糖培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，酵母粉6g，（NH4）2SO43g，琼脂粉20g，加水定容至1000mL，pH自然。在120℃高压蒸汽灭菌30min[7]，无菌条件下倾注平板，待用。
⑤ 小麦琼脂培养基：小麦粒125g，琼脂粉20g，加水至1000mL，pH自然[8]。将小麦粒放于500mL水中煮2h，放置一昼夜后用纱布过滤，取滤液，不足1000mL用水补足，加入琼脂粉加热至完全溶解，在120℃高压蒸汽灭菌30min，无菌条件下倒平板，待用。
1.3 培养方法
1.3.1 接种 在无菌条件下，选取大小相同母种菌丝块，分别接于 5 种培养基平板中，每种培养基为一组，每组 10 个重复，然后放于恒温、恒湿相同条件进行培养观察，记录菌丝体生长过程及状态。
1.3.2 培养条件 恒温培养箱设为25℃避光培养。
1.3.3 观测方法 每天定时、定点标记并测量1次菌丝生长量，菌丝生长势及密度，分别将上述5种培养基的菌丝生长情况并相互对比观察。
1.3.4 镜检 当菌斑直径达5cm时，挑取各培养皿内正红菇的气生菌丝，用光学显微镜400倍进行镜检，观察其菌丝形态及其生长的状况。
2 结果与分析
经近20d的培养观测，在这5种不同培养基上菌丝生长状况差别较大[9]（表1）。
表1 5种培养基分离正红菇菌丝生长状态对照
菌丝 菌丝 菌丝 菌落边缘
培养基 接种时间 萌发力 生长势 密度 整齐度 长满培养
① 2011-05-12 强 弱 一般 不整齐 平面时间/d
② 2011-05-12 强 强 密 整齐 11
③ 2011-05-12 弱 强 一般 不整齐 11
④ 2011-05-12 弱 强 一般 整齐 >10
⑤ 2011-05-12 强 强 密 整齐 8
注：① 为马铃薯葡萄糖培养基（PDA）；② 为马铃薯综合培养基（CPDA）；③ 为玉米粉综合培养基；④ 为马铃薯蔗糖培养基；⑤ 为小麦琼脂培养基（下同）。
如图1，各种培养基生长速度有所不同，其中培养基⑤菌丝生长速度快，可用于正红菇快速繁殖栽培的实践中；培养基③菌丝生长速度最慢，不适合于正红菇的快速繁殖栽培，也不适合于菌种保藏；培养基②（CPDA）生长速度不快，但菌丝密度大。
