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(北)虫草液体菌种制作及质量检验方法
作者:    来源:《食用菌市场》2009年第六期    点击数:   文章发布时间:2010年06月02日 【字体:

  随着国内外市场对虫草产品需求的增加,虫草生产方式由小户型、季节性生产的模式逐渐向工厂化、标准化、周年化、规模化生产发展。伴随新技术、新工艺、新设备的研发问世,采用深层培养工艺制备虫草液体菌种已应用于生产中。由于液体菌种具有成本低、生产周期短、菌龄一致、接种简便快捷、便于管理等优点,因而深受虫草栽培者的欢迎。

  一、虫草液体菌种的生产方式

  一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵(吹氧)法、发酵罐法。

  1、电磁搅拌法。设备技术比较简单,投资较少,但生产量小,生产的液体菌种是菌丝团。

  2、摇瓶机法。摇瓶机培养投资少,设备技术简单,管理方便,适合一般菌种厂生产使用,生产出来的液体菌种是菌球。

  3、简易深层发酵(吹氧)法 。 制作工序繁琐、配套设备要求较高、各部件必须在无菌条件下进行组装,生产的液体菌种是菌球。

  4、发酵罐法 。 需要一整套的发酵设备,投资大,技术要求严格,只适用于工厂化的大规模生产,生产出来的液体菌种是菌球。

  二、虫草液体菌种的培养方法

  通常采用摇瓶机法和简易深层发酵(吹氧)法来生产培养液体菌种。若小规模生产,一般可采用摇瓶机法培养液体菌种。本文主要介绍摇瓶机振荡培养技术。

  1、 液体培养基配方

  (1)土豆20%(煮汁)、葡萄糖2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁 0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。

  (2)土豆30%(煮汁)、蚕蛹粉2%、蔗糖1%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。

  (3)土豆20%、葡萄糖2%、玉米粉2%、黄豆粉1%、酵母膏0.2%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.05%、水1000ml、pH值自然。

  (4)葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.l%、磷酸二氢钾 0.1%、硫酸镁 0.05%、生长素5ml、水1000ml、pH值自然。

  (5)葡萄糖2%、蛋白胨0.2 %、磷酸二氢钾0.046 %、硫酸镁0.05 %、磷酸氢二钾0.1 %、水1000ml、pH值自然。

  (6)葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、牛肉膏0.4%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05 %、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。

  (7)葡萄糖3%?、豆 粉2%、玉米粉1%、硫酸镁?0.05%、磷酸二氢钾0.1%、酵母粉0.5%、水1000ml、pH值自然。

  (8)葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、玉米粉2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、水1000ml、pH值自然。

  (9)葡萄糖2%、黄豆粉1%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.04%、氯化钠(食盐)0.03%、味精0.01%、维生素微量、水1000ml、 pH值自然。

  (10)蔗糖3%、天门冬酰胺0.1 %、磷酸二氢钾0.125 %、硫酸镁0.03 %、氯化钠(食盐)0.05 %、水1000ml、pH值自然。

  2、液体培养基的制作

  (1)按配比精确称取各种营养物质。

  (2)配制溶液。为避免发生沉淀,可将各种营养成分单独溶解分别制成母液,加入的顺序一般是先加缓冲化合物,溶解后加入主要元素,然后是微量元素,再加入维生素等。最好是每种成分完全溶解后,再加入第二种营养成分。若各种成分均不发生沉淀,也可以一起加入。

  若用马铃薯、玉米粉、黄豆粉等原料时,应先制取这些原料煮汁,然后再把煮汁与其它成分混合。

  例如:配方一液体培养基的配制。   土豆20%(煮汁)、葡萄糖2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁 0.05%、维生素B1 2片、水1000ml、pH值自然。

  (3)将新鲜土豆洗净去皮、挖掉芽眼的土豆切成小块放入小锅或大烧杯中,加入一定量的水,用文火煮沸30分钟左右,至土豆软而不烂时,用6~8层布过滤,取滤汁于锅中。

  (4)补水。 加水至1000~1200 ml。

  (5)按配方顺序加入需加的其他营养物质,文火煮5~10分钟。

  (6)充分搅拌均匀,并调PH。

  一般用10%HCl或10%NaOH调pH,用pH试纸(或pH检测仪)进行测试。

  (7)沉淀分装。 培养液配制好后,沉淀1小时取上清液,分装入500mL容量的三角烧瓶中,每瓶装量为100mL;750mL的瓶装量为200mL;1000mL的瓶装量为300mL,在配制培养液时,可加入0.02%的植物油或0.06%的泡敌(聚环氧丙烷甘油醚)作为消泡剂消泡,防止在培养过程中培养液产生气泡。为了击碎菌丝每瓶内加入5~10粒小玻璃珠。

  (8)塞棉塞 。棉塞松紧适度,不宜过紧。加棉塞后再包扎牛皮纸封口,这样既可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发。

  (9)用记号笔注明培养液的名称和日期。

  (10)灭菌

  ① 首先将内层灭菌筒取出,再向外层锅加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。

  ② 放回灭菌桶,将包扎好的三角瓶直立放入灭菌桶内,盖上牛皮纸,三角瓶不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

  ③加盖,将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。

  ④ 通电加热,并同时打开排气阀,使水沸腾排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升,在1.0~1.1kg/cm2压力下,灭菌30分钟。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。

  ⑤ 灭菌所需时间到后,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,缓慢打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养液由于内外压力不平衡而冲出三角瓶,造成棉塞沾染培养液而发生污染。

  三、摇瓶机振荡培养技术

  灭菌结束后,取出培养液冷却到30℃以下时,在无菌条件下接入一块约2厘米的斜面菌种,菌丝面向上悬浮于培养液液面。在20℃~22℃条件下避光静置培养48小时,再置往复式摇瓶机上振荡培养,振荡频率为80~120次/分,振幅6厘米~10厘米。如果用旋转式摇瓶机,振荡频率为200~220转/分。摇瓶机室温控制在22℃~25℃,冬季室内温度低,可将摇瓶机放入恒温箱内培养。培养时间一般是在5~7天左右。

  四、虫草液体菌种的检验方法

  虫草液体菌种进行质量检验可采用感官检查、显微镜检查、空白培养基检查和取样测验等方法。

  采用电磁搅拌法培养或摇瓶机法培养液体菌种,终止培养后,常用目测法检验,将三角瓶摇晃静止后,如菌丝球均匀地分布于三角瓶中,培养液清澈、无异味,液体中悬浮着大量均匀的小菌丝球,并伴有蛹虫草特有的香味,表示符合质量要求。

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  常用计量单位符号 1、时间:d(天)、h(小时)、min(分)、s(秒)。 2、长度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面积:m2(平方米)、667m2(亩)、hm2(公顷)。 4、体积:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、质量:t(吨)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、浓度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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