食用菌液体菌种生产技术操作规程
李俊
（商洛市农产品质量安全检验检测中心，陕西商州 726000）
摘要：食用菌液体菌种具有活力强、纯度高，接种后发菌快，缩短菌种发菌时间等特点，经多年在生产中应用，效果显著。为提高食用菌液体菌种生产技术，结合我们多年的生产实践经验，将食用菌液体菌种生产技术规程作以介绍，以广大食用菌液体菌种生产者。
关键词：食用菌；液体菌种；技术规程
传统固体菌种生产，一般由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高，而且菌种因多次扩繁容易退化。液体菌种生产具有纯度高、活力强，接种后萌发点多，发菌快，缩短菌种发菌时间，成本低，可增加栽培批次，为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。陕西省商洛市农科所自2008年引进液体菌种设备生产线以来，广泛应用于香菇、木耳、平菇、白灵菇等菌类液体菌种生产中，效果显著，实现了菌种生产的一次质的飞跃。结合我们这几年的实际生产液体菌种的经验，现将食用菌液体菌种生产技术规程介绍如下，供广大食用菌液体菌种生产者参考。
1 液体菌种生产操作工艺流程
摇瓶空灭→摇瓶培养基的制作→灭菌→冷却→接种→培养→摇床培养→发酵罐的清洗→发酵罐的空灭→发酵罐培养基的生产→灭菌→冷却→接种→菌丝培养→接栽培袋→发菌培养。
2 培养基配方
2.1 摇瓶培养基配方
土豆20%、麦麸3%、蛋白胨3‰、葡萄糖2%、磷酸二氢钾2‰、硫酸镁1‰、维生素Ｂ 1片。
2.2 发酵灌培养基配方
土豆20%、麦麸2%、蛋白胨3‰、葡萄糖2%、磷酸二氢钾1‰、硫酸镁0.5‰、石膏0.5‰、琼脂2－3ｇ、酵母膏0.5‰、消泡剂1‰。
3 摇瓶液体菌种生产技术
摇瓶在使用时除清洗之外，还要进行空灭，灭菌方法同常规灭菌试管培养基相同。1 000ml摇瓶做600ml培养基，按照摇瓶配方称取原料，先称取麦麸，开水煮沸20min，捞出，再放入土豆蒸煮至土豆熟，过滤定容，加入其余的原料至溶解。在摇瓶中放一粒转子，培养基冷却后放入摇瓶中，将瓶口和胶皮管口用棉塞塞紧，并用牛皮纸包扎。将摇瓶放入高压锅灭菌中，在温度121℃，压力在0.15 MPa灭菌40min，待培养基冷却后接种。在接种箱中接摇瓶种，接种箱常规消毒后在液面上接6块黄豆大的母种菌种块（菌种块尽量少带培养基），使菌丝面向上，菌种块必须漂浮在液面上，接种结束后塞好棉塞。然后放入恒温箱中在26℃的条件中静止培养3－4d。待接种块在培养液面上长到1cm（单个菌种块）时停止培养。在摇床上放一个小不锈钢盆子，将摇瓶和温度感应器放入其中，开动电磁摇床进行培养，设定温度27℃，转速以调至有一分钱硬币大小的漩涡为基准，摇40min，停10min，自动控制。一般香菇种需4－5d，其余菌种一般需3－4d。标准：摇瓶摇动后有菌丝挂壁，培养液浑浊度达90%以上，如有较臭味，则表明有杂菌污染，不可使用。
4 发酵罐液体菌种生产技术
4.1 发酵罐的清洗
发酵罐在每次使用后或再次使用之前都必须对其进行彻底的清洗之后才能投料使用。洗罐主要是除去罐壁的菌球、菌块料液及其它污物。操作时用自来水管冲洗内壁，对于内壁粘附的污物可用木棒包上一些软布揩拭即可。
4.2 发酵罐的空灭
一是新发酵罐初次使用时；二是上一罐感染杂菌时；三是发酵罐长时间不用时；四是更换新品种时；属上述情况者都要进行空灭。连续生产或上一批生产完只需将罐洗净就可以进入下批生产者不需空灭。
4.3 发酵罐的空灭操作程序
发酵罐内层及夹层加水至试镜中线，启动加热器加热，首先排完夹层和内层的冷空气，然后关闭所有的阀门升温升压，温度升至100℃，0.05MPa压力下，打开接种口放气阀，排放罐内冷空气。当温度达到121－126℃，压力在0.12－0.15MPa时维持30－50min。压力降至0.05 MPa时，打开接种阀，使罐内的水通过接种管及接种枪排出，关闭接种阀门，将接种枪放在装有75%酒精的塑料袋内，使其无菌，以备接种用。
4.4 发酵罐培养基的制作
按照发酵罐培养基的配方称取原料，30l发酵罐做20l培养基。培养基的熬制同摇瓶培养基的方法，熬好后加入发酵罐中，再加入热的消泡剂消泡，打开气泵搅拌，加水至视镜中线定溶。
4.5 培养基灭菌
开启加热器对发酵罐夹层及内层加热，当压力达到0.05MPa时打开接种口放冷气至接种口蒸汽变直时关闭接种口，待培养液温度升至95℃时，打开气泵对发酵液进行搅拌2min，气泵停止通气。当压力达到0.12－0.15 MPa，温度为121℃开始记时，维持40min。
4.6 降温
培养基灭菌完毕，迅速通水降温。降温过程中发酵罐要适当通气，一方面搅拌降温，另一方面加压，使发酵罐维持正压，尽快使发酵液温度降至30℃以下。
4.7 接种
将摇瓶接种管和发酵罐接种口用75%酒精消毒，用95%酒精的火焰圈套在接种口上，轻微打开呼吸器阀门，使发酵罐压力为0。点燃火焰圈，摇瓶接种管放在火焰上方，用镊子去掉接种管上的牛皮纸和棉塞，将胶管插入接种口，打开接种口阀门，将摇瓶菌种注入发酵罐，关闭接种阀门，然后拔出接种胶管，去掉火焰圈，打开气泵。
4.8 培养
通气后调节呼吸器，使内罐压力稳定在0.01－0.03MPa，当培养48－72h后即可看出小米粒状的菌丝球，呼吸器排出的培养料的香味随着培养周期的延长越来越淡，到培养后期取而代之的是一种淡淡的菌液清香味，菌丝球浓度和菌液粘度逐渐增大。一般品种的生长周期为72－96h，培养好的液体取样后放置5min基本不分层，且菌球大小均匀，颗粒分明，菌球周边菌丝明显。培养过程中要间隔12h取样，恒温箱培养6－12h萌发，取样同样需要火焰圈保护。
5 接种
液体菌种培养好以后，将接种气管（胶管）和接种抢提前灭菌，接种房间也应提前消毒，若在电子消毒器的保护下接种效果更佳。接种时先放掉一部分菌种，尽量减少感染机会。用接种枪把料面用液体菌种封住，一般每袋（瓶）接入8－10ml即可。
6 液体菌种存放时间
液体菌种生产好后，应立即进入菌种生产或栽培袋接种使用，若因某些原因不能立即使用时，需降温保压处理。一般在12－15℃以下可保存2－3d，10℃以下可存放3－5d，但也与品种和残余营养成分有关。
参考文献：
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项目来源：陕西省重大科技创新项目，编号2008ZKC7－10。
