平菇液体菌种发酵条件的研究
邱立友 张建威
(河南农业大学生物工程学院，郑州450002)
答旭东
(平顶山市酿造总厂)
余培威
(郑州市奥克啤酒厂)
河南农业科学 2000年第10期
摘要 研究了培养基组成、pH值、粘度、摇瓶装液量和添加有机氮对平菇P831液体菌种发酵生产的影响。结果表明，选用麸皮培养基可获得较高的菌球数和菌丝量，菌球在PDA平板中的生长速度是马铃薯培养基和玉米粉培养基的1.6倍和2.0倍。发酵生产适宜的pH值为7.0。500ml摇瓶装液量为125ml。在培养液中添加0.4%的琼脂增加粘度，菌球直径由0.65mm下降至0.35mm,菌球数和菌丝童分别提高68.4%和164%0添加0.1%和0.3%的蛋白胨平均提高菌丝量59.4%。
关键词 平菇 液体菌种 发酵条件
平菇液体菌种与其传统的固体菌种相比，具有生产效率高、接种简便、接种点多、发菌快、抗杂性强等优点，因而应用越来越广泛。影响平菇液体菌种发酵生产的因素，包括有培养基的组成、pH值、粘度以及通风量等。我们对有关平菇液体菌种的发酵条件进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 菌种
平菇P831(Pleurotuso streatus P831)，由河南农业大学生物工程学院菌种厂提供。
1.2 培养基及培养方法
1.2.1 斜面菌种采用PDA培养基，25℃培养120个小时。
1.2.2 液体菌种培养基的筛选 用3个500ml三角瓶，分别装入100ml马铃薯培养基、玉米粉培养基和麸皮培养基，接入1cm2PDA斜面菌种，25℃,150～180r/min旋转摇床培养120个小时。
1.2.3 培养液pH值的调节 用NaOH溶液将麸皮培养基pH值分别调至pH为4.0,5.0,6.0,7.0和8.0。
1.2.4 培养液粘度的调节 在麸皮培养基中添加0.2%～0.5%的琼脂，以调节其粘度。
1.2.5 培养液装液量对菌种生产的影响 设5种装液量，分别为50,75,100,125,150ml.
1.2.6 培养液中添加有机氮对菌种生产的影响 在麸皮培养液中分别添加0.1%和0.3%的酵母菌或蛋白陈，观察对菌种生产的影响。
1.3 测定方法
1.3.1 菌球个数和大小测定 准确吸取培养液5ml，滴于直径为9cm的培养皿中，计其菌球个数，并测量菌球直径。
1.3.2 菌丝量的测定 将培养液用二层纱布过滤后，再用蒸馏水冲洗数次，沥干，然后在60℃恒温箱中烘5小时，置于干燥器中冷却至室温，用光电分析天平称重。计算每100ml培养液中菌丝干重。
1.3.3 菌丝生长速度测定 在显微镜下挑取培养液中的单个菌球接在PDA平板中央，25℃培养，从第12小时开始，采用十字法测定菌丝生长速度[3]。
1.3.4 培养液pH值测定 采用酸度计法。
2 结果与分析
2.1 液体菌种培养基的优选 从表1可见，在三种培养基中，麸皮培养基的菌球数最高，达55个/ml，分别是马铃薯培养基和玉米粉培养基菌球数的3.9倍和4.6倍。麸皮培养基和玉米粉培养基中菌球的直径小于1.0mm，比较适宜；而马铃薯培养基中菌球直径大于1.0mm，不利于液体培养时溶氧和营养物质的传递，这可能与其培养基粘度较小有关。培养基中菌丝量以麸皮培养基的最高，分别是马铃薯和玉米粉培养基的11倍和19倍，且菌球生长速度快，为27.0mm/d，分别是前两种培养基的1.6倍和2.0倍。综合以上比较，麸皮培养基明显优于另两种培养基。故以下实验均选用麸皮培养基。
表1 三种液体培养基培养平菇P831的结果
2.2 培养液pH值对液体菌种生产的影响 从表2可以看出，培养液pH值对平菇P831液体菌种的发酵生产同样有较大的影响。培养基pH值在4.0,5.0和8.0偏酸性和偏碱性时，菌球数均较少，菌丝量较低；pH值在6.0微酸性时，菌球数较多，菌丝量也较高；当pH值为7.0时，菌球数最多，菌丝量最高。表明液体菌种生产适宜pH值为7.0。从表2还可以看出，当pH值在微酸性和中性时，菌球直径较大，而当pH值偏酸性和偏碱性时，菌球直径较小，其原因有待进一步探讨。
表2 培养液pH值对平菇P831菌种生长的影响
2.3 培养液粘度对液体菌种生产的影响 从表3可见，随着在培养液中添加琼脂量的增加，即培养液粘度加大，菌球直径明显缩小。与不加琼脂的对照相比，在培养液中添加0.4%的琼脂，菌球直径由对照的0.65mm下降到0.35mm，菌球数和菌丝量比对照分别提高68.4%和164%。
表3 培养液不同粘度对平菇P831菌种生长的影响
2.4 培养液装量对液体菌种生产的影响 当摇床旋转频率一定时，摇瓶中装液量越少，培养液溶氧速率越高，越有利于增加菌体与氧接触的机会。然而，过高的溶氧速率对菌体生长并非有利。当装液量为50ml和75ml时，菌球数分别为4个/ml和5个/ml,菌丝量也较低。当装液量增至150ml时，菌丝量虽然较高，iii菌球数同样较少，为9个/ml。装液量为100ml和125ml时，菌球数和菌丝量均较高。适宜的装液量为125ml，其菌丝量最高(表4)。
表4 通风量对平菇P831菌种生长的影响
2.5 培养液中添加有机氮对液体菌种生产的影响 在麸皮培养液中分别添加0.1%和0.3%的酵母菌或蛋白陈，尽管菌球数与对照相比差别不大，但菌丝量与对照相比均有明显提高。添加酵母菌和蛋白脏，菌丝量平均比对照分别提高59.7%和59.1%。然而，添加酵母菌后菌球直径则由对照的0.60mm增大至1.10mm，对生产不利(表5)。
表5 添加有机氮化合物对平菇P831菌种生产的影响
3 小结
食用菌液体菌种发酵生产指标包括有菌球数、菌球直径、菌丝量和菌球萌发生长速度等。研究表明，在常用的三种培养基中发酵生产平菇P831液体菌种，麸皮培养基明显优于马铃薯培养基和玉米粉培养基。平菇P831液体菌科发酵生产适宜的pH值是7.0,500ml摇瓶中装培养液125ml，添加0.4%的琼脂可明显提高菌球数、缩小菌球直径和增加菌丝量。添加0.1%和0.3%的蛋白陈，可明显提高菌丝量。
参考文献
1 郭成金，李爱民，孟庆恒等.平菇液体菌种的生产应用，食用菌，1996(4):12～13
2 何佳，赵启英，田娟增稠剂对食月菌深层发醉的影响. 食用菌.1999(3):10～11
3 宋漳，黄耀坚.不同菌株中拮抗菌筛选及对绿色木毒的拮抗试验.中国生物防治.1997,13(1)_21～22
