微粒草籽试管菌种制作及液体发酵中的应用

张烜 袁玫
江苏省谷亮农业科技有限公司

　　笔者在长期的固体发酵和液体发酵实践中，分析总结了半固体的琼脂斜面试管种、木屑、木屑麸皮、木粒、竹粒、枝条及麦粒、谷粒等颗粒菌种的特点和应用效果，认真寻找可以提高液体发酵质量的生产种制作材料和方法。在一次野外作业中，无意中发现了微粒野生草籽，经多次试验，制作出液体发酵专用的试管菌种，在液体发酵环节应用效果相当理想，遂申请并获得发明专利的授权，专利号（ZL200710133722·4）。现将微粒草籽试管种的制作方法及在液体发酵中应用无偿的公开和推介。
　　1 微粒草籽的采集
　　野生草籽，尤其挤身于庄稼丛生的竞争性杂草，总是让农民深恶痛绝。然而，世上无弃物，只要留意，总能找到可用之处。笔者曾苦心寻找的试管种原料，就是麦田的伴生恶草——看麦娘，其粒度确实微小，是普通麦粒的1/150～1/180，也就是说150或180个草籽粒度相加，才有一个麦粒大，其作为试管种，尤其液体发酵专用试管种的优势是：①粒度小，表面面积大，作为菌种，它的萌发点多，有利于快速挤满发菌空间。②草籽有一层坚硬的外壳，做菌种材料，可有效避免麦粒、谷粒的破皮等现象。③草粒表皮有一层革腊质，光滑流动性好，又因粒度小，作为在液体种应用中，可有效避免堵塞漏接。④草籽是一种植物籽实，作为菌种材料，其碳、氮营养成分与谷粒相当，接入液体培养基后，不造成斜面菌圈的老化衰退现象，它可以源源不断的供给液体培养基萌发点和初生菌丝，甚至在液体种传代中，能延续在多级或固体培养物上继续萌发。
　　在农民麦子收获登场的脱粒扬晒过程中把抛弃的草屑中筛取，也可在粮食部门、粮食加工企业的筛选，丢弃的杂质中筛选，也可以在麦田的田边、田埂或荒地中割取。
　　将采集的草籽经风选、水选去除杂质后，晒干，存放干燥处备用。
　　2 微粒草籽试管种制作
　　把备用的无霉变草籽放在阳光下曝晒或烘干，去其水分。根据需要，称量草籽，放入3%蔗糖溶液中浸泡24h，让草籽吸足水分捞出晾干。用1%琼脂或0.8%海藻酸钠或0.8%羧甲基纤维素钠溶解后加入0.3%KH2PO4和0.15%Mg2SO4调适宜pH，搓拌均匀。
　　按谷粒试管种的方法装试管，留足试管口部位的四分之一空白试管，用光滑的铁棒或竹棒，把试管的装料部压出一个接种槽，塞好棉塞常压或高压灭菌后冷却。
　　灭菌冷却后在无菌接种箱酒精灯上方的火焰无菌区，用接种铲把斜面菌种割成条状，接入草籽试管的接种槽，塞好管塞，进行常规发菌管理。
　　3 微粒草粉试管种在液态发酵生产的应用
　　根据生产目标，制作一定的液体培养基，以培养皿或三角瓶为盛器，装5～8mm高度的培养液，在无菌状态下把搅碎的微粒草籽试管种，接入培养皿或三角瓶静置培养36～48h，待微粒草籽萌发后按无菌要求，接入二级发酵罐或三级发酵罐增氧培养，常规管理直至发酵终止。
　　如果用于固形物接种，可在摇匀情况下，选接菌孔少粗一些的接种枪，按6%～7%的接种量接种，可以达到常规液体接种10%发菌效果。