拌料
选好配方后,按照配方的要求加水拌料。在配料的过程中,要注意以下几点:
① 锯木屑要经过2~3目筛,除掉木块、木条、木片、霉料团等硬物。按照配方要求配料,用机器或人工充分拌匀。将糖类物质溶于水中,随水均匀拌入料内。要做到主、辅料均匀,干湿均匀,酸碱度 适宜,无生料团。
② 搞好环境卫生,拌料的场地最好是水泥地面,使用前要用水冲刷干净,尽量减少污染。
③ 灵活掌握含水量,对干料、细料加水宜多一些;对湿料、粗料加水宜少一些。在水泥场地拌料加水宜少一些,在干泥渗水场地拌料加水宜多一些,具体加水量以拌好料堆闷半小时后,用手紧握料有水从指缝渗出、但不成滴下落即可。
④ 操作要迅速,在气温高时(28℃以上时),如拌料至灭菌时间过长,则料易变酸。轻者影响发菌,重则不发菌。因此,要合理安排好生产量,保证在高温期从拌料到灭菌不超过4小时,在低温期从拌料至灭菌不要过夜。
装瓶与封口
所用菌种瓶要提前刷洗干净,控干后备用。木屑或棉子壳培养料装瓶,装料至瓶颈可用木棒压实、压平、料面须在瓶肩以下。然后要在料中间扎直径为1.5~2厘米的孔,将瓶口内外壁擦净。取一块完整、略大于掌心的棉絮卷成棉塞,棉塞要比瓶口略粗,稍用力即可旋入瓶口为宜。塞入瓶口2/3、外露1/3,棉塞头部,与瓶颈的底口平,要松紧适度。如过紧,会影响通气,发菌慢;过松不但棉塞易脱落,且起不到过滤杂菌的目的,容易引起杂菌的感染。塞好棉塞后,盖上牛皮纸或双层报纸,用皮筋扎紧。
灭菌
采用高压灭菌或常压灭菌。高压灭菌的压力通常为1.5~2千克/平方厘米,灭菌时间为2~2.5小时。常压灭菌需8小时以上。
接种
接种前必须使瓶温降至30℃以下,这样做可以防止高温接种时烫死菌种,有冷却室的在冷却室冷却,没有冷却室的可以直接在冷却室冷却。每支试管母种一般可以转接3~4瓶原种。接种前首先要把接种室或接种箱打扫干净,喷洒30倍的“菇老爷”牌金星消毒液或使用“随缘100烟雾弹杀菌剂”进行熏蒸处理,再把已经灭菌后的菌种瓶及其它用具都全部搬进去,然后按常规对接种室或接种箱进行严格的消毒处理。为了保证菌种的成活率,接种时一定要严格按照无菌操作进行。
具体操作方法是:接种者手持母种试管,用酒精棉球将试管内外擦干净后,拔出面色,试管口对准酒精灯火焰上方,用火焰烧一下管口,把烧过的接种勾迅速插入试管内壁冷却,将试管斜面前端1厘米长的菌丝块挖去,剩余的斜面分成3~4段,另外一个人在酒精灯的火焰上方,在接种者取好菌种块的同时拔开原种瓶棉塞,接种者将菌种块取出,快速接入原种瓶的接种穴内,棉塞过火焰后塞好。如此一支试管可接3~4瓶原种。每接完一支试管,接种勾要重新过火消毒,防止交叉感染。接完种后,立即将台面收拾干净,将各种残物如试管、洒落的培养基、棉塞等均需清理出室外,照前述方法进行第二轮接种。
培养
原种或栽培种培养时需要注意的事项:
首先要提前几天打扫培养室,对水泥地面、墙壁等进行清洗,并严格消毒处理后才可使用。培养室要求保持空气干燥、清洁、避强光,留有能启闭的通风口,要保证空气流通无死角。
将接种后的原种、栽培瓶或菌袋拌入培养室,保持温度在25℃左右,保持空气相对湿度在55%~65%。一般3~5天菌丝即可吃料,7~10天菌丝即可封面。待菌丝封面后,要加强通风换气,保持室内空气新鲜,一般培养25~35天菌丝即可长满瓶或袋。
培养期间要随时检查菌袋,发现有污染杂菌应及时采取措施。瓶或袋内杂菌滋生部位不同,其污染的原因也不同:如棉塞受潮,空气湿度过大时,瓶或袋口部位极易滋生红色或白色的链孢霉。如瓶或袋内上下均发生绿霉或毛霉等杂菌,则可能是灭菌不彻底。如随机发现接种块四周发生杂菌,则可能是接种操作不熟练或棉塞过松所致。如紧邻几瓶或袋的种块部位全部滋生杂菌,可能是母种带杂菌或接种工具灼烧不严所致。不管哪种情况,一旦发现杂菌危害后,必须及早清除,以防蔓延导致大批菌袋发生杂菌感染。初期污染的菌种瓶或菌袋可重新彻底灭菌,重新接种,不可延误。
菌袋除污染杂菌外,有时也会出现种块也不萌发的现象。其原因是:一是接种工具灼烧后未冷却就开始去挖取菌种块,菌丝被烫死或菌丝过火焰时被烧死。二是母种干缩、老化,失去了萌发力。三是培养温度不适宜,菌种瓶灭菌后未冷却,致使菌种受热而死。
有的菌种块虽能萌发,但却不吃料,其原因是:菌种块与培养料结合不紧密;培养料偏干;培养料的酸碱度不适宜;培养料内添加了过量的抗杂菌药物如多菌灵等。因此,接种时要使菌种块与培养料紧密结合;坚持随拌料随装瓶,及时灭菌防止培养料变酸;选用培养料木屑时要严防混入松柏类的木屑;配料时不要随意添加或过量添加一些抑菌药物,以防止菌丝生长受到抑制;要保持室内空气湿度为55%~65%;要远离热源,使种瓶受热均匀。