母种培养基的配制
1. 母种培养基的种类
母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：
① 马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基： 马铃薯（去皮） 200克 琼脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
② 麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基： 干麦芽 250克 琼脂 15～20克 葡萄糖（或蔗糖） 10克 水 1000毫升
③ 胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基： 胡萝卜 100克 琼脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
④ 蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇）： 鲜蘑菇 250克 琼脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
⑤ 蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基： 蛋白胨 2克 葡萄糖 20克 磷酸氢二钾 2克 维生素B1（硫胺素） 0.5毫克 磷酸二氢钾 0.5克 琼脂 18克 硫酸镁 0.5克 水 l000毫升
2. 母种培养基的制法
以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15～20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。塞好棉塞后，每10支作一捆，用牛皮纸包扎好后，置铁丝网笼中，然后进行高压灭菌。如作为孢子分离用，则将培养基分装于三角瓶或培养皿中，然后高压灭菌。
3. 母种培养基的消毒灭菌
母种培养基通常用高压蒸汽灭菌锅来消毒灭菌，常用的高压蒸汽灭菌锅有直式、卧式和手提式三种。将配制好后的母种培养基移入上述任何一种高压蒸汽灭菌锅中，在15公斤/平方厘米 压力下，消毒灭菌30分钟。
高压蒸汽灭菌主要是依靠提高蒸汽的温度来灭菌的，因此灭菌时，应将锅内的冷空气全部排除。否则，尽管压力表上的压力已达到要求，然而，灭菌锅内的温度却未达到所需的温度（表11）。排除冷空气的方法是加热后当压力表上指针上升到0.5公斤/平方厘米时，打开排气阀，放气至指针仍回到“零”的位置。灭菌的时间是以排除冷空气后，压力回升到1.5公斤/平方厘米 时才开始计算。每次灭菌之后，要等压力降到“零”时，才打开锅盖，否则，灭菌的液体会因突然减压而外溢，玻璃器皿也会因突然降温而破裂。
下表高压灭菌时压力的换算及其与温度的关系 ：
磅/平方英寸 公斤/平方厘米 灭菌器中的温度（℃）
排除空气 未排除空气
5 0.352 108.4 72
10 0.703 115.2 90
15 1.055 121.0 100
20 1.406 126.0 109
25 1.758 130.4 115
30 2.109 134.5 121
在没有高压蒸汽灭菌锅设备的情况下，可用蒸锅、蒸笼等进行常压灭菌。由于密封性差，压力升不高，温度只能升至102℃左右因此要连续蒸4～6小时才能达到灭菌的目的。
高压严菌后将试管取出排成斜面备用。
母种分离材料的选择
1. 子实体的选择
无论是用作孢子分离或组织分离的子实体，都要从产量高，长势好，适应性强，无杂菌虫害的群体中，选择朵大，生长健壮的单生子实体作为分离的材料。
选作分离的子实体，成熟度要适当，如蘑菇、草菇具有菌膜，最好选菌膜将破而未破的成熟度，这种子实体发育已成熟，子实层又未受污染，因此能很快散出大量的无菌孢子。对没有菌膜或菌膜自幼已破的食用菌，如香菇、平菇等，则以选取八分熟，正在释放孢子的个体为最好；因为刚从担子弹射出来的孢子基本上也是无菌的。
2. 菇木和耳本的选择
木生食用菌如香菇、银耳、黑木耳等，可以从它们生长的基质，即菇木和耳木作为分离的材料。选择时，应从野生或人工栽培场所挑选子实体生长健壮，朵大，长势好，菌丝在段木中发育旺盛，材质较为结实，尚未腐烂，一般是接种后一年内已出菇、出耳而无杂菌害虫感染的幼龄菇木或耳木为最好。采去子实体后，截取适当部位，挂于通风处风干后，供分离时用。
母种的分离方法
1. 孢子分离法
是利用食用菌的有性孢子或无性孢子，萌发成菌丝，获得细菌种的一种方法。按分离时挑取孢子的数目不同，又分为单孢子分离法和多孢子分离法两种。蘑菇、草菇等由于孢子没有性的区别，采用单孢子分离获得纯菌种，有结实能力，而其它食用菌如香菇、银耳、黑木耳等由于孢子有性别之分，单孢子分离得到的菌丝不能结实，所以，只在育种上采用，生产上很少采用多孢子分离法，是把许多孢子接种于同一培养基上，让它们萌发，自然交配而获得纯种，操作简单易学，生产上经常采用。由于采集孢子的方法不同又分为如下几种：
