3.6.2 保持种源纯度
任何单位和个人不得更改引进、鉴定、登记注册的菌种名和编号。
3.6.3 菌丝纯度
菌丝生长正常,色泽一致,无异色异味,无混入杂菌。
3.7 菌丝外现形态指标
菌丝白色,棉絮状,在固体培养基上菌丝末端生长整齐,呈放射状,均匀,一级种无黄水和褐色菌斑,有少量爬壁菌丝。成熟的二、三级木屑种色泽一致,木悄呈米黄色,有香菇特有的气味,表面无或有少量褐斑、酱色分泌物,变温刺激和光照后有少量原基出现。
3.8 容器
一级种的容器为直径15mm~20mm×150mm~200mm的透明玻璃试管,带有松紧适宜的棉花塞,培养基与棉塞相距2℃m~3℃m;二级种容器为750ml 透明玻璃瓶或相当容量的塑料瓶;三级种为透明的玻璃瓶、塑料瓶或相当容量的聚丙烯菌袋,均为松紧适宜的棉塞或套环、棉花塞。
3.9 保藏期
在4℃条件下,一级种保藏期为3~4个月,二、三级种的保藏期为6~8个月;菌丝在隔氧的条件下(如液体石蜡隔氧保藏)保藏期为期1年;在-196℃的液氮中保藏期为3~5年或更长;液体菌种发酵期满即使用。
3.10 包装和运输
一、二级种出售时棉塞应有灭菌过的牛皮纸包裹,菌袋间有适当的间隔;每支、瓶、袋菌种均有菌种标签,批量出售的菌种有种说明书;外包装有防雨、防潮、防高温、防摩擦、防重压和易碎品的标记。菌种在菌丝正常生长的温度下非密闭包装运输,高温季节夜间或气调运输。
3.11 菌种标志
除符合有关菌种规定外,还应符合{菌种管理条例}有关格式,标签规格如下:
级别:A L—℃r
菌号:℃r—72
接种时间:
单位:
A代表一级种,B代表二级种 ℃r代表杂交种,T代表组织分离种,S代表孢子分离种。
4 菌种质量检验方法
4.1 检验是香菇菌种的方法
4.1.1 标签检验
核对菌种名称、菌种编号、确认是香菇菌种和是已审定的菌株。
4.1.2 外现目测菌丝检验
按本标准中3。7菌丝外观形态指标检验。
4.2 检验香菇菌种是活体的方法
4.2.1 生长现象检验
在无菌的条件下把菌丝移植于PDA或木屑培养基上,置于23℃~25℃温度下培养,有生长现象。
4.2.2 呼吸现象检验
将菌丝置于20℃以下的温度培养,在菌丝上方的试管壁或玻璃瓶壁有水雾或水珠出现。
4.3 菌种纯度检验的方法
4.3.1 目测检验
按本标准中3.6菌种纯度和3.7菌丝外现形态指标的标准检验。
4.3.2 培养检验
按本标准中4.2.1生长现象检验的方法检验,无发现杂菌。
4.4 活力检验的方法
4.4.1 菌丝恢复生长检验
从4 ℃移至23℃~25℃条件下培养,48h内恢复菌丝生长;在PDA培养基上置于23℃~25℃条件下培养,菌落直径24h伸长0。5℃m以上。
4.4.2 显微检验
在显微镜下观察,锁状联合频率高。
4.4.3 呼吸量检验
用华勃氏呼吸仪或氧电极测试法,测定一定容量内单位重菌丝生长空间氧分压降低程度和℃O2排出量,耗氧量大、排出℃O2量多的菌种活力强,相反活力弱。
4.4.4 酶活性检测
酯质同功酶、多酚氧化酶、纤维素酶、虫漆酶等可作为检验菌种活力强弱的指标之一。多酚氧化酶含量高的菌种是菌丝菌龄短、活力强的菌种;纤维素酶和虫漆酶含量高的菌种是活力强、生物转化率高的丰产菌种。
4.5 菌种同拮抗检验
4.5.1 菌丝拮抗检验
把不同来源的香菇菌丝接种在同一培养上,有对峙反应的菌种是具有不同遗传基因的菌种,没有对峙反应的是具有相同基因的菌种。
4.5.2 同功酶测定
通过菌丝蛋白粹取后对蛋白质中电泳层析酶谱的显色,测出谱带相似程度,以此检验菌种间的异同和遗传特性和相似程度。这是菌种异同程度和是否新菌株的鉴别方法之一。
4.6 菌种种质特性分子标志检测
以各菌株细胞中染色体中遗传表达结构中的大小分子或分子基因为标志,检测菌种优良程度,并限得该菌株标志。常用的方法除同功酶谱测定外,还有电泳染色体组型脱氧核糖核酸(DNA)鉴定分析法、限制性片断长度多态性(RFLP)分析法等。