第二节 显微镜和显微技术

　　绝大多数微生物个体小，需用显微镜观察它们的个体形态及内部结构

　　一、显微镜的种类及原理
　　1、普通光学显微镜
　　目镜﹡物镜
　　总放大倍数：1000-1500倍

　　2、暗视野显微镜
　　整个视野是暗的，样品是亮的，可清晰观察在明视野显微镜中不易看清楚的活菌体等透明的微小颗粒。

　　3、相差显微镜
　　细胞各部分折射率和厚度不同，人眼能在不染色的情况下比较清楚地观察到在普通光学显微镜和暗事业显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构。
　　4、荧光显微镜
　　有些化合物（荧光素）可以吸收紫外线并转放出一部分分光波较长的可见光，这种现象称为荧光。
　　在紫外线照射下，发荧光的物体灰在黑暗的北京下表现为光亮的有色物体，此为荧光显微技术的原理。

　　5、投射电子显微镜（transmission election microscope,TEM）
　　电子作为光源
　　6、扫描电子显微镜（scanning election microscope,SEM）
　　工作原理类似于电视或电传真照片
　　7、扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope,STM）
　　主要原理：量子力学中的隧道效应。

　　二、显微观察样品的制备

　　据所用显微镜的特点采用适合的制样方法，考虑生物样品的特点，尽可能使被观察样品的生理结构保持稳定，并通过各种手段提高其反差。
　　1、光学显微镜的制样
　　活体直接观察，染色观察
　　（1） 活体观察
　　①压滴法 菌悬液于载玻片，加盖玻片观察
　　②悬滴法 盖玻片中央加一小滴菌悬液，反转置于特别的凹载玻片上观察，一般在载玻片四周加凡士林防止液体挥发。
　　③菌丝埋片法无菌小块玻璃置于平板表面，涂布放线菌，培养后，取下玻璃纸终于载玻片上，观察菌丝形态。
　　特点：避免对细胞结构的破坏并可专用于研究微生物的运动能力，摄食特性及生长过程中的形态变化。
　　细胞分裂、芽孢萌发等动态过程只能观察其大体形态和运动情况，不能观察起细致形态和主要结构。
　　（2） 染色观察
　　先固定，其目的有二：一是杀死细菌并使其粘附于玻片上，二是增加其对燃料的亲和力。

　　2、电子显微镜的制样（略）