研究了鸡腿蘑(Coprinus comatus)黑斑病的发生情况、症状及病原菌的分离、培养、回接、鉴定等,证实轮枝孢霉(Verticillium sp.)是引起鸡腿蘑黑斑病的病原菌。
　　鸡腿蘑;黑斑病;症状;病原;轮枝孢霉
　　
　　鸡腿蘑(Coprinus comatus)又名毛头鬼伞、毛鬼伞、刺蘑菇,隶属于真菌门(Eumycophyta),担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目(Agaricales),鬼伞科(Coprinaceae),鬼伞属 (Coprinus)。鸡腿蘑子实体味道鲜美,是一种食、药兼用蕈菌,深受消费者的欢迎,在国际、国内市场的需求量大。由于栽培鸡腿蘑的经济效益高,近年来,我国的鸡腿蘑产量逐年上升。但随着栽培年限的延长,特别是设施周年栽培的普及,病虫害问题逐年加重。 2004年,我们在山东省长清、平阴、东平等地发现了一种鸡腿蘑新病害——黑斑病。该病发病快、传染性强、危害严重,影响了鸡腿蘑的高产稳产。因此,我们对鸡腿蘑黑斑病发生的症状和病原菌的显微形态进行了调查研究,旨在明确该病的病原菌、并为鸡腿蘑黑斑病的有效防治提供技术支持。
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1样本采集
　　试验样本于2005年7月下旬采自山东省长清崮山镇一山洞栽培的鸡腿蘑出菇现场。该栽培洞温度偏高(22 ℃左右),顶部及四壁滴渗水,空气湿度大,通风条件差。该病同批发生面积大(约6000 ㎡),发病率在70%以上,发病快、危害严重且传染性极强,难于控制其蔓延。试验样本为感染黑斑病的鸡腿蘑头潮子实体,多点取样采集病菇样本后带回实验室进行分离纯化培养。
　　1.2病原菌分离纯化
　　1.2.1培养基
　　复合PDA培养基:马铃薯200 g,麦麸30 g(滤汁),葡萄糖20 g,蛋白胨3 g,磷酸二氢钾2 g,硫酸镁1 g,琼脂粉20 g,蒸馏水1000 mL。
　　酸化复合PDA培养基:复合PDA培养基灭菌后,每100 mL培养基中加入1 mL乳酸(山东省莱阳经济技术开发区精细化工厂生产的分析纯,C2H6O3含量85%~99%)酸化,用于病原菌分离。
　　1.2.2病原菌分离方法
　　参照方中达的组织分离法[1]。将感病子实体纵刨,夹取病健交界处大约2~3 mm2的一小块菌肉组织,置于分离培养基平板上,共分离30块组织块(每点分离2~3块),25 ℃培养5 d,连续纯化2~3次得到菌丝组织纯培养物,保存于复合PDA试管斜面上备用。
　　1.3回接试验
　　按文献[1]的方法将分离到的病菌制成孢子悬浮液,喷雾接种到生长中的健康鸡腿蘑子实体上,对照喷无菌水。分离获得的每个病菌菌株均为一个接种处理,每个处理与对照均重复2次,每个重复5个菌筒,接种后于12~21 ℃、空气相对湿度90%培养5 d,观察鸡腿蘑子实体的发病情况。
　　1.4病原菌显微鉴定
　　将分离得到的原病原菌和回接试验分离得到的病原菌分别接种于复合PDA平板上, 25 ℃培养7 d后,观察平板上的菌落生长形态;在Olympus AO-120显微镜下(600×)检测病原菌菌丝及分生孢子形态。
　　
　　2 结果与分析
　　
　　2.1病害症状特点
　　鸡腿蘑黑斑病发病初期,菌蕾或幼菇表面可见一层白粉状病原菌,之后菌盖上出现黑褐色斑点,并逐渐扩大,病斑中心凹陷、色泽变深,产生灰白色病原物,后期形成较多粉状孢子。幼菇发病后可继续生长,但发育不良,色泽灰白,病斑部位质地较干,局限于菌盖表层组织。随着菇体生长和病斑发展,子实体多呈畸形,菌盖短薄,病斑部位开裂干腐,后期菌柄受感染,上部外层组织剥裂,表面粗糙,产生黑斑,菌肉由外向内变污白至黄褐色,病菇腐烂速度较慢,一般不湿腐,不分泌褐色汁液,无特殊臭味。病菌侵染由外向内,病菇整体很快变黑褐,失去商品价值。该病在菇房中传染性极强,一丛菇体中若有一个子实体菌盖开始发病,很快便传染到菇丛中的其它菇或邻近菇丛,最后造成大面积减产甚至绝产。鸡腿蘑黑斑病症状见图1。
　　2.2病原菌分离、回接与确认
　　从30块组织块中,共分离获得16株相同的病原菌菌株(有12块长出单一的病原菌,有4块同时长出了鸡腿蘑菌丝和病原菌,其余14块均只长出鸡腿蘑菌丝),病原菌检出率为53.3%,未检出其它杂菌。将16个病菌菌株重新回接到健康的鸡腿蘑子实体上,结果16个菌株均引起鸡腿蘑子实体出现黑斑,与菇房自然发病症状相同,而对照子实体生长正常,无任何症状。从发病子实体上可以重新分离到病原菌,其培养性状与接种菌株完全一致,表明该病原菌为引起鸡腿蘑黑斑病的病原菌。
　　2.3病原菌的形态鉴定
　　在复合PDA培养基平板上,病原菌菌落呈淡白色,密毡状,表面有放射状皱折,中央微隆起(图2)。显微镜检表明,病原菌分生孢子梗直立,轮生,有3~4个分枝,顶层小梗下部膨大,顶端尖细,梗长20~25 μm,分生孢子单生于小梗顶端,无色,单细胞,大小2.0~2.5 μm×3.5~6.0 μm。菌丝分枝,有隔,直径2.5 μm左右(图3)。初步确定该病原菌为轮枝孢霉(Verticillium sp.),隶属于真菌门 (Eumycophyta),半知菌亚门 (Deuteromycotina),丛梗孢目(Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),轮枝孢属 (Verticillium)[2]。
　　
　　3 讨论
　　
　　通过对鸡腿蘑感病子实体的分离、回接验证及显微镜形态观察,初步证明鸡腿蘑黑斑病是由轮枝孢霉(Verticillium sp.)侵染引起的。据报道,危害食用菌——蘑菇(Agaricus bisporus)、平菇(Pleurotus ostreatus)、金针菇(Flammulina velutipes)的轮枝孢霉主要是菌生轮枝霉(V. fungicola Hassebr.,即V. malthouosei Ware),菌褶轮枝霉(V. lamellicola W. Gams)和蘑菇轮枝霉(V. psalliotae Tresch)。对该病的防治除了严格菇房环境消毒外,苯丙咪唑类药物的防治效果较好,但有些地区的轮枝孢霉对苯丙咪唑类药物已产生抗性[3,4]。本试验分离到的鸡腿蘑黑斑病病原菌具体属于轮枝孢霉的哪一个种还有待进一步鉴定。

　　此外,为了控制鸡腿蘑黑斑病的发生、发展和危害,还须对该病进行系统研究,以明确病原菌的生物学特性、侵染途径、流行机制,并进行鸡腿蘑抗病品种筛选,以及制定综合防治技术,遏制该病的发生蔓延,保证鸡腿蘑及其它食用菌生产的健康安全发展。
　　
　　参考文献 （略）

　　文章作者：黄春燕 万鲁长 单洪涛 郭惠东 张柏松　文章来源：《食用菌学报》 2008年第01期