接种操作规程

　　1.杂菌无处不在，接种是一个严格无菌操作的过程，是一个与杂菌作斗争的过程，所有接种操作人员都必须要竖立严格的无菌操作意识，按规程要求进行接种作业。

　　2.熟练的接种操作技术对接种成功率有着直接影响，所有操作人员都必须尽力提高自己的接种操作技术水平。

　　3.接种室开放式接种的接种量对接种成功率有着较大的影响，接种量大，菌种覆盖均匀成品率相对较高，接种人员不得贪图简便少接或接入不均。

　　4.接种室是一个与外界环境相对隔离的区域，人员要同进同出，尽量减少与外界空气的交换。

　　5.进入缓冲间后更换工作服、鞋、帽，戴口罩。在自动净手器下喷洒酒精对双手进行消毒后，一同进入无菌操作间开始接种作业。

　　6.进入无菌操作间应先开启电子净机对空间进行净化作业，人员操作需在净化机无菌区域内进行。

　　7.使用预先配制好的消毒溶液对菌包进行外表消毒，一次性处理完毕待用。消毒时要注意观察菌种有无污染或长势异常。

　　8.使用75%酒精对双手、接种工具进行擦拭消毒，接种工具擦拭后在酒精灯火焰上来回转动灼烧3~4圈，稍冷却。

　　9.将菌种拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌种，然后用接种勺将菌种刨碎（小麦粒大小）即打开菌包接入菌种。菌种必须用完一袋处理一袋，每袋菌种使用完毕后接种工具和手都必须重新消毒一次。

　　10.每袋菌包接入菌种三勺，大约25克。菌包接种孔必须接入菌种，如接种孔有堵塞的可用接种勺向下捅入。接入料面的菌种一定要注意分布均匀，不均匀的可适当摇动使其均匀。

　　11.接种中，待接种菌包的棉花塞要用右手小指和手掌将其夹住，不得放置于操作台面上。塞回时要在酒精灯火焰上转动一圈后塞入。

　　12.接好一筐种后，端上架子车前套环棉塞要侧向压倒，切忌压倒时棉花塞触碰到料面，棉花在携带杂菌，常压灭菌很难将其杀灭干净，触碰料面易引起菌包污染。

　　13.接种操作要力求快速敏捷，尽量减少开袋后菌包在空间的暴露时间。

　　14.接种时如发现有菌种被污染的要将菌种袋拧紧密封，单独放置，并重新对手和工具进行严格的消毒。

　　15.接种作业完毕后按《接种室使用规程》要求做好清洁工作。

接种室使用规程

　　1.接种室分为缓冲间和无菌操作间，均为洁净区域，凡进入此区域者均需遵守本规程。

　　2.接种室控制温度为18~22℃,湿度≤90%。

　　3.无菌操作间无新风过滤系统，操作人员及酒精灯燃烧所需氧气由门缝等处进入，携带杂菌较多，因此与无菌操作间相邻的冷却间、缓冲间、过道都必须保持干净整洁，并定期进行消毒作业。

　　4.无菌操作间及缓冲间每月应进行一次洁净度的检测，检测方法为：将直径9cm的培养皿注入PDA培养基15ml,灭菌冷却凝固好后，在接种时将培养皿打开暴露30min后盖上盖，于30~35℃下倒置培养48h后观察结果。

　　5.缓冲间设计洁净度为30万级，检测结果培养皿平均菌落数应≤15个，无菌操作间设计洁净度为10万级，培养皿平均菌落数应≤10个。

　　6.进入接种室应先在缓冲间更换工作服、穿专用鞋、戴工作帽、口罩，头发应用工作帽帽兜兜住，不得批肩或散落。

　　7.进入接种室严禁随便走动、打闹、高声谈笑，不接听和拨打电话，接种操作时动作要轻柔、快捷。工作服、鞋、帽要勤洗勤换。

　　8.无菌操作间使用臭氧消毒，消毒前注意将两端的门关闭严实，当菌种、菌包、药品物件等准备妥当后即可开启臭氧机，消毒人员在开启臭氧机后一定要嗅到臭氧腥味并确定臭氧机正常工作后方可离开，每批次消毒时间为2小时，间隔40~60分钟后可进入接种室进行接种作业，最长间隔时间不可超过1.5小时。

　　9.无菌操作间的洁净度会随着作业时间的延长而降低，接种操作应尽量快速敏捷，一次接种时间不宜超过两小时。

　　10.机器设备是无菌操作间赖以存在的基础，必须定期的进行维护保养，确保机器有效平稳运行。臭氧机滤网每月清洗一次，电子净化机过滤网、电场每月清洗一次，活性炭网每年更换一次。

　　11.接种室要同进同出，进出时动作要迅速，进入后马上将门关闭，不可长时间将门打开，致使外界带菌空气过多的进入。接种期间严禁人员进出。

　　12.接种室两天以上未使用，再次使用前应进行一次密闭空间消毒。保持接种室清洁，接种人员不得将与生产无关的物品带入接种室。

　　13.接种室配备的消毒液浓度为：酒精70%~75%，甲酚5%，新洁尔灭0.1%~0.2%及按规定配备的其它消毒剂。

　　14.接种室每批次操作完毕后都必须做好清洁，地板、角落及轨道槽内料渣要打扫干净，无菌操作台及墙壁应用抹布醮取消毒水擦洗干净。地板用消毒水进行拖洗，拖洗后地板上的明水要用吸水拖把吸干。

　　15.接种室扫帚、拖把、抹布等专室专用，每日扫除的垃圾要及时清走。

　　16.无菌操作间冷却盘管防水槽每月至少冲洗一次，以防灰尘、杂菌聚积，带来污染隐患。接种室门、玻璃每半月必须擦洗一次。

电子净化机维护保养规程

　　1.电子净化机随着工作时间的延长，集尘板、过滤网会吸附和聚积微尘、细菌，影响净化、杀菌效果，为保证电子净化机有效平稳运行，应每月进行维护保养。

　　2.过滤网维护

　　2.1  拧动盖板螺丝，将净化机盖板打开，抽出过滤网。
　　2.2  用清水或清洁剂水将过滤网浸泡15分钟，然后冲洗干净并晾干装回原处。
　　2.3  清洗工作每月进行一次。

　　3.电场维护

　　3.1  打开净化机盖板，拨开挡片，按箭头方向取出电场。
　　3.2  在大塑料桶内放入适量水和清洁剂，将电场浸入水中浸泡15分钟，然后用双手托住电场在水中来回摇动，使聚积在电场上的脏物彻底掉落，不可用刷子或抹布擦洗。
　　3.3  电场洗净后取出，然后用清水进行冲洗，直至目丝、集尘板上无清洁剂痕迹残留。
　　3.4  清洗冲净后的电场要站立放置，在阴凉处自然风干，不可在太阳下曝晒。
　　3.5  检查目丝是否破损或弯曲、断裂，如有更换目丝。
　　3.6  使用欧姆表检测双高压接点与电场外壳的绝缘是否良好，如有短路现象应及时排除。
　　3.7  检查完好后，装回原处，盖上盖板即可。
　　3.8  电场每月清洗一次。

　　4.活性炭网的维护

　　4.1  取下电场盖板，将活性炭网抽出。
　　4.2  换上新的活性炭网，盖上盖板即可。
　　4.3  活性炭网根据使用情况，每年至少更换一次。

接种室消毒方法

　　1.接种室每日分两批进行接种，每批接种六车，人员定编为八人。

　　2.消毒前需先将已挑选好的菌种搬入接种室，准备好接种必须的工具、药品。

　　3.合上臭氧消毒器电源，用遥控器将其开启，闻到有臭氧腥臭味后人员方可离开。

　　4.遥控器使用方法：按下“开/关”键，臭氧发生器发出“嘟”的一声，出风口有带臭氧味气体吹出，出风口内有两块电板显现蓝紫色光芒并发出“吱吱”声为正常开启。

　　5.遥控器程序已预先设定好，在非正常情况下不得随便按动其它键。

　　6.如在使用遥控器时，按下“开/关”键，臭氧机不工作，可按下“制热”或“制冷”键。其它设定键请不要随便按动。

　　7.臭氧机消毒时间为两小时，消毒时间到后请在缓冲间直接将臭氧机电源切断即可。

　　8.臭氧机接种室两台，缓冲间一台，开启时每台都必须依次开启，只有确认臭氧机正常工作后方可离开。

　　9.消毒人员进出缓冲间进行消毒作业进出必须将门关严，关闭臭氧机时，进出要迅速，尽量避免内外空气的大量交换。

　　培养皿制作新法

　　培养皿用培养基可与制作试管所用的培养基一起制作，不必使用专门的细菌培养基，分装后用报纸包装好，直接入锅灭菌，灭菌完冷却至凝固好后取出，要使用时拆开报纸即可。

　　一般直径90MM，每皿装量20ML

　　作者：ccaxw　来源：中国食用菌论坛