4.7 生产过程中的技术要求
　　4.7.1 容器
　　4.7.1.1 母种
　　使用玻璃试管和棉塞，试管18 mm×180 mm．1或20mm×200mm，棉主要使用梳棉，不应使用脱脂棉。
　　 4.7.1.2 原种
　　使用650 mL-750 ml，耐126℃高温的五色或近五色的玻璃茵种瓶，或850 ml耐126℃高温白色半透明符合GB 9687卫生规定的塑料菌种瓶，或15cm×28cm耐126℃高温符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋．各类容器部应使用棉塞，棉塞应符合4.7.1.1规定；也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。
　　4.7.1.3 栽培种
　　使用符合4．7．1．2规定的容器，也可使用≤17 cm×35 cm耐126℃高?符合GB 9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都应使用棉塞或无棉塑料盖，并符合4．7．1．2规定。
　　4.7.2 培养原料
　　4.7.2.1 化学试剂类
　　这类原料如硫酸镁、矿酸二氢钾等，要使用化学纯级试剂。
　　4.7.2.2 生物制剂和天然材料类
　　生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净；干燥。
　　4.7.3培养基配方
　　4.7.3.1 母种培养基 一般使用附录A中第A.1章规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)或第A.2章规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA），特殊种类需加入其生长所需特殊物质，如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等，但不应过富。严格掌握PH值。
　　4.7.3.2 原种和栽培种培养基
　　根据当地原料资源和所生产品种的要求，使用适宜的培养基配方（见附录B），严格掌握含水量和PH值。
　　4.7.4 分装
　　母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分之一至五分之一，灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm，原种和栽培种培养基装至距瓶(袋)口不少于60 mm，灭菌后不少于45 mm。棉塞大小松紧要适度。原种和栽培种培养基的松紧度要一致。
　　 4.7.5 灭菌
　　母种的培养基配制分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应在4 h内进锅灭菌。母种培养基灭菌0.11 Mpa?0.12 Mpa，30min，木屑培养基和草料培养基灭菌0.12 MPa，1.5 h或0.14 MPa?0.15 MPa，1h，谷粒培养基、粪草培养基和木塞培养基灭菌0.14 MPa?0.15 MPa，2.5 h。装容量较大时，灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制降压．常压灭菌时，在2 h之内使灭菌室温度达到100℃，保持100℃8 h?lO h。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培弃基和木塞培养基，应高压灭菌，不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
　　4.7.6 灭菌效果的检查
　　母种培养基置于28℃恒温培养，原种和栽培种培养基经无菌操作接种于GB 4789.28--1994中　　4.8规定的营养肉汤培养基中，于28℃恒温培养，48 h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。
　　4.7.7 冷却
　　冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺消毒过的塑料薄膜后，将灭菌后的原种瓶（袋）或栽培种瓶（袋）放置在冷却室中冷却到料温降至适宜温度。
　　4.7.8 接种
　　4.7.8.1 接种室（箱）的基本处理程序
　　清洁→搬入接种物和被接种物→接种室（箱）的消毒处理。
　　4.7.8.2 接种室（箱）的消毒方法
　　用药物消毒并用紫外灯照射．
　　4.7.8.3 净化工作台的消毒处理方法
　　先用75％酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净20min．
　　4.7.8.4 接种操作：在无菌室（箱）或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。
　　4.7.8.5 接种室（箱）后处理
　　接种室每次使用后，要及时清理清洁，排除废气清除废物，台面要用75％酒精或新洁尔灭溶液擦试消毒。
　　4.7.9培养室处理：在使用培养室的前两天，采用药物消毒。
　　4.7.10培养条件
　　根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度（多在22℃--28℃），保持空气相对湿度在 %以下，通风，避光。