三、原种繁殖培养

　　将母种接在瓶或袋的木屑培养基上，通过培养，即成原种。
　　1、原种棉籽壳木屑培养基配方
　　棉籽壳30kg，木屑50kg，麦麸15kg，复合肥1kg，水135kg。将上述原、辅料混合拌匀，装入750ml的玻璃菌种瓶内，装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花塞，再用牛皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高压灭菌锅内，在147千帕/cm²压力下灭菌2～2.5小时。也可进行常压灭菌，在100℃下保持10～11小时，达标后趁热取出，让其冷却。
　　2、接入菌种
　　待料温降至25℃以下时，在灭菌条件下，将试管种分割成若干块，通过酒精灯火焰迅速接入原种培养基上，每支母种可接4～6瓶原种。
　　3、发菌培养，去杂选优
　　接种后及时将玻璃菌种瓶移入25℃菌种培养室内进行培养。空间相对湿度控制在70%以上，避免强光照射。
　　原种培养时间一般需要30～50天即可。原种培育过程中，要每天进行观察，如发现有杂菌污染的，则应立即淘汰。

　　四、栽培种扩大培育

　　1、栽培种制作
　　栽培种的接种、培养方法与原种相似。就是用原种作菌种扩大。每瓶原种可扩大50～80瓶。原种表面菌膜不能作接种用。在适温条件下培养30～35天即为栽培种，可用于生产栽培。栽培种可用750ml菌种专用瓶。

栽培种接种示意图

　　2、使用菌种袋制种
　　由于栽培种使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有14cm ×28cm、17cm×33cm等，可根据各地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌，要求灭菌温度达100℃，保持8～10小时，达标后趁热卸袋冷却。待料温降至25℃以下时，在无菌条件下接入选定品种的原种。每瓶原种可扩接成50～60瓶栽培种。菌种培育室要求干净，防强光，室温掌握在23～25℃。并经常检查，发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋，尖端菌丝反转上爬1～3cm时，为适龄的栽培种。

　　五、无菌条件下制种

　　1、接种室的消毒
　　为减少接种过程的杂菌感染，接种室要在接种前进行消毒灭菌。先把所有接种工具及菌种、待接种的菌棒放入室内，用高锰酸钾、甲醛密闭熏蒸2小时以上。用量为每m³空间5g高锰酸钾、10ml甲醛。为减轻甲醛对身体的影响，熏蒸后放置碳酸氢铵可以驱除甲醛气味。
　　由于甲醛对人体有害，近年来使用甲醛消毒的越来越少了，很多人选择用气雾消毒剂来消毒。
　　2、紫外线消毒
　　紫外线灯照射灭菌就是将灭菌室或接种箱用黑窗帘或黑布遮光（防止光复合），每20m³空间用1支30瓦紫外线灯照射2小时。
　　3、超净工作台
　　超净工作台是一种局部净化设备，即利用空气洁净技术，使操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。使用时，必须放置在洁净的空间。其接种数量不受无菌空间的限制，操作比较简便，可以较大幅度地提高工作效率，适用于大规模生产。为了保证接种成功率，接种时使用酒精灯，效果更好。
　　4、酒精灯的应用

酒精灯的火焰图谱

　　正常使用的酒精灯火焰应分为焰心、内焰和外焰三部分。近年来的研究表明：酒精灯火焰温度的高低顺序为：外焰＞内焰＞焰心。一般认为酒精灯的外焰温度最高，其原因是酒精蒸汽在外焰燃烧最充分；但由于外焰与外界大气充分接触，燃烧时与环境的能量交换最容易，热量散失最多，致使最外焰温度有所下降。
　　很多操作者对酒精灯火焰各部位温度高低常发生误认现象，上述介绍希望对你有所帮助。