许庆国
（泰安市农业科学研究院，山东泰安 271000）
《食用菌》2013.1
摘要 北虫草菌种在保藏一段时间后，菌种会失去活力，衰老退化，造成产量下降，甚至绝产。因此，规模生产菌株遗传性状保持稳定是很重要的。试验用北虫草子实体的两个部位进行分离试验，优选出适合北虫草生产的分离菌种。试验结果：选取鲜嫩北虫草子实体顶端靠尖1～2cm处，不去皮，结果表现性状优异，遗传性状稳定一致。而在子座以上部位，去皮移植，则表现生长力弱。
关键词 北虫草菌种 子实体 分离技术
北虫草，又名北冬虫夏草，蛹虫草，和冬虫夏草同属不同种，具有极高的营养价值和医药价值。随着冬虫夏草数量日趋减少，作为冬虫夏草的替代品，北虫草越来越受到人们的喜爱。大规模生产遗传性状稳定是关键。北虫草菌种在保藏一段时间后，菌种会失去活力，衰老退化，造成产量下降，甚至绝产。为保证生产的连续性和优质高产的子实体，笔者对北虫草子实体不同部位进行组织分离试验，以期分离出和原菌种性状一致的菌株，有效的保持菌种活力，为规模化生产北虫草提供性状稳定的菌种资源。
1 材料与方法
1.1 试验菌株 北虫草Q保存于山东省泰安市农科院，分离材料为北虫草Q子实体。
1.2 供试培养基 ① 母种培养基：乳糖15g/L，蔗糖20g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏5g/L，磷酸二轻钾0.2％，硫酸镁0.1%，VB1 20mg，VB6 10mg，琼脂2%，水1000mL[1]。② 液体培养基：马铃薯100g/L，蔗糖20g/L，牛肉膏5g/L，蛋白胨15g/L，磷酸二轻钾2g/L，硫酸镁1g/L，维生素B1 2片，B6 1片[2]。
1.3 其它试验器材 接种箱，高压锅，恒温震荡摇床等。
1.4 试验方法
1.4.1 分离 选取生长正常，鲜嫩，橘黄色北虫草Q子实体，于无菌接种箱内，按无菌操作要求，用75%酒精擦拭子实体，再用无菌水冲洗晾干，手术刀过酒精灯火焰，反复灼烧，待降温后，在灭菌过的培养皿切取子实体上部（距顶端1～2cm处）数小段，用无菌镊子夹取一段放入高压灭菌母种试管底部（以Q-1标记）[3]；同样方法，切取子实体下部数小段，并且去外皮，放置母种试管底部（以Q-2标记）。均放置于25℃恒温箱无光培养待长出白色菌丝，挑去尖端菌丝，按常规操作转管，待菌丝长满试管，选取满管时间短，菌丝健壮，无污染，保藏备用。
1.4.2 菌种培养 按无菌操作要求，分别挑取Q，Q-1，Q-2，母种3块（0.5cm2）放置盛100mL液体培养基三角瓶，25℃恒温摇床，150r/min，培养5d，备用。
1.4.3 出草培养 小麦粒25g，料液比1∶1.2，装于500mL罐头瓶，高压灭菌，冷却接种5mL液体种。每个菌株20个罐头瓶。25℃暗室培养，待菌丝长满底部，22℃室内散射光照培养，培养室湿度80%以上。待成熟时，观察子实体性状，采集、干燥、称重，计算平均产量（g/瓶），对试验数据作方差分析。
2 结果与分析
由表１、表2看出，所接菌种均能出草，Ｑ-１均表现密度大，头部膨大，表现最好，Ｑ次之，Ｑ-2表现最差。
表1 北虫草子实体性状
表2 北虫草产量，转化率分析
由表2可知，分离Q-1与Q差异不显著，与Q-2差异极显著。根据菌种组织分离原则，分离种表现应大于或接近原始种，分离菌种才成功。由此Q-1分离种接近Q，性状相似。此结果与杨玉红[4]等研究有所差别，可能与北虫草不同品种所致，还需进一步研究。
3 小结
北虫草子实体分离应严格灭菌操作，转管后发现变色，发菌慢，菌丝异常，都要淘汰，一定选取发菌快，菌丝洁白，见光转色快的菌株，如此才能分离到纯正菌种。
必须进行出草试验，长出与原始种性状相似的虫草。选取分离种Q-1，即选取鲜嫩北虫草子实体顶端靠尖1～2cm处，不去皮，结果表现性状优异，遗传性状稳定一致。
参考文献
[1] 许庆国.不同碳氮源对北虫草菌丝生长的影响[J].食用菌，2011（4）：10-11.
[2] 许庆国.北虫草液体培养菌种碳氮源的研究[J].食用菌，2011（6）：13-14.
[3] 林树钱.中国药用菌生产与产品开发[M].中国农业出版社，2000∶401-406.
[4] 杨玉红，刘芳，康宗利，等.北虫草菌种人工分离的研究[J].中国食用菌，2012，31（1）：11-12.
