灰树花工厂化袋栽原基形成条件研究
许占伍 张引芳 金力 朱爱莲
（上海浦东天厨菇业有限公司，上海浦东201203）《食用菌》杂志2012.2
摘要 灰树花为食用菌工厂化生产研究的新品种。对袋栽灰树花后熟期、环境条件等对原基形成的影响研究。结果表明：菌丝发满袋后熟10～15 d，袋壁割口搔菌诱导出菇，菌丝恢复期和现蕾期温度控制为：20～22℃；16～18℃，光照控制为：0 h/24 h，空气相对湿度控制为：97%～99%；89%～91%，通风量控制为：4min/10min；10min/10min，有利于原基的形成。
关键词 灰树花 工厂化 原基诱出
灰树花[Grifola frondosa（Dicks，ex Fr）S.F.Gray]，又名贝叶多孔菌、千佛菌、栗子蘑、云蕈、莲花菌等，日本称之舞茸。灰树花肉质脆嫩，营养丰富，含有生物活性物质，具有提高人体免疫力和抗肿瘤作用。灰树花人工栽培研究始于日本，上世纪80年代实现了工厂化生产。我国在20世纪80年代初开始对灰树花进行人工驯化栽培，并在河北、浙江省有少量栽培，但主要依靠自然条件，以大棚栽培为主，技术尚不成熟，产量不及日本的2%。在现有的灰树花大棚栽培中普遍存在原基分化能力弱，定位不一致等问题，造成产量较低、品质差，且生产不稳定，无法满足正常的灰树花市场供应需求。
灰树花较之其他食用菌，存在着适应性差、抗逆、抗杂菌能力弱等不足之处[1]，其突出表现在子实体发生时期。食用菌子实体发生是指菌丝在培养基质中经营养生长后，菌丝扭结、原基出现、子实体形成并向生殖生长过渡的生理过程。此生理过程对食用菌的生物学效率有重要的影响，是食用菌研究的主要领域[2]。笔者对灰树花子实体形成关键时期（原基形成期）进行试验研究，摸索出原基形成期最佳环境参数，以期为灰树花工厂化栽培奠定技术基础。
1 材料与方法
1.1 菌株 灰天1号，浦东天厨菇业有限公司选育。
1.2 栽培基质 母种培养基：PDA。液体培养基：天厨菇业灰树花栽培发酵罐配方，按照工厂化液体种操作工艺培育，培养7～8d后接种。
栽培种培养料：天厨菇业灰树花栽培2号配方，含水量控制在60%～62%，pH自然。
1.3 栽培要点 按照工厂化栽培培养料搅拌工艺进行拌料，将所得混合基料采用装袋机装入18cm×36cm的聚丙烯袋和20cm×39cm带空气过滤口（以下简称透气仓袋）的聚丙烯袋中（CK），每袋装入湿料1000～1100g，扣好套环，高温灭菌，灭菌时间为混合基料的中心温度达到118～121℃，并保持30min；将灭菌后的混合基料强制冷却至22～25℃后接种，接种量为20～30ml。培养室温度控制在（22±1）℃，室内湿度维持在65%～80%，CO2浓度控制在2500mg/kg以下。菌丝发满袋后备用。
1.4 试验方法
1.4.1不同后熟期对原基形成的影响 菌丝发满后，分别后熟培养：0d（CK），10d，15d，20d，30d，在后熟期形成原基的，直接检出出菇，未形成的割口诱导原基，每袋割2个孔。观察后熟期吐黄水污染情况，原基形成和出菇情况。共3次重复，每个处理200袋。
1.4.2 搔菌对原基形成的影响 对达到后熟期的菌袋，进行割口搔菌诱导原基形成，每袋在侧面割2个口，孔径为1.5cm，搔去表面的菌皮，搔菌深度为0.5cm，透气仓袋的不搔菌，做为对照。放置在原基诱导室进行原基诱出，共3批重复，每批各做200袋。统计原基诱出时间、形成率和后期子实体产量。
1.4.3 温度对原基形成的影响 原基形成期分为菌丝恢复期和现蕾期[3]，温度调控分为割口搔菌后菌丝恢复期温度及现蕾期温度，分别设置以下4个处理：（22～24℃；18～20℃），Ⅱ（20～22℃；18～20℃），Ⅲ（20～22℃；16～18℃），Ⅳ（18～20℃；18～20℃）。统计原基形成时间和原基形成率。试验3次重复，每个处理做200袋。
1.4.4 不同光照时数对原基形成影响 菌丝培养期，置于22℃避光的培养室发菌培养直到后熟结束，光照调控分为菌丝恢复期光照，和现蕾期光照，光照时数以24h内间歇式光照总时间为准，如24h光照8h，其仪表盘上时间设定为光照20min，间隔10min，分别设置以下5个处理：①（24h/24h），②（12h/24h），③（0h/24h），④（0h/12h），⑤（0h/0h），光源为日光灯，光照强度200lx。试验3次重复，每个处理做200袋。统计原基形成率，观察转色情况。待原基转色后，根据灰树花子实体生长所需光照，重新调整光照时数。
1.4.5 空气相对湿度对原基形成的影响 菌丝培养期，置于22℃避光的培养室发菌培养直到后熟结束，搔菌后至原基形成期间，空气湿度调控分为菌丝恢复期湿度，和现蕾期湿度，采用工厂化超声波加湿调控系统加湿，设置以下5个处理：a（97%～99%；97%～99%），b（97%～99%；93%～95%），c（97%～99%；89%～91%），d（93%～55%；89%～91%），e（89%～91%；89%～91%）。统计原基形成和污染情况。试验3次重复，每个处理做200袋。
1.4.6 通风量对原基形成的影响 菌丝培养期，置于22℃避光的培养室发菌培养直到后熟结束，搔菌后放置在生育室，在菌丝恢复前设置进风时间为：4min/10min（进风开4min，停10min），现蕾期分别设置4min/10min，8min/10min，10min/10min，12min/10min，14min/10min五个处理，测定生育室CO2浓度，统计原基形成情况。试验3次重复，每个处理做200袋。
2 结果与分析
2.1 不同后熟期对原基形成的影响 表1结果表明：菌丝发满后立即搔菌，原基形成率很低，只有73.2%，且有部分原基无法开片形成子实体，平均单产低，后熟期在15d的，原基形成率达到98%以上，且原基都能够正常开片，单产达260g以上。随着后熟期的延长，原基形成率相对较低，观察发现，这主要是由于后熟期延长，灰树花吐黄水现象增加，后期料面菌丝出现大量细菌和霉菌污染，影响原基形成率和后期产量，因此，灰树花袋栽后熟期控制在10～15d较为适宜。
表1 培养后熟期对原基形成的影响
后熟天 吐黄水 污染现象 原基分 平均袋
数/d 现象 化/% 产量/g
0 无 无 73.2 152.1
10 少量 个别细菌污染 95.1 238.6
15 少量 个别细菌污染 98.6 260.5
20 较多 较多细菌和少量霉菌污染 94.7 250.1
30 多 大量细菌和霉菌污染 90.3 219.7
2.2 搔菌对原基形成的影响 灰树花菌袋搔菌后，原基诱出室培养9～10d，割口处原基形成，原基形成率达98.3%，正常每袋两个搔菌孔都可以形成原基，袋产量平均达273.1g，明显高于带透气仓不搔菌的187.3g，且诱出时间一致，子实体菇形整齐；而不搔菌的原基形成时间波动较大，后期容易产生代谢黄水，影响原基形成率，且菇形不整齐。因此，搔菌诱出原基，更适合工厂化生产。
表2 搔菌对原基形成的影响
处理 诱出原基时间/d 形成率/% 袋产量/g
搔菌 9～10 98.3 273.1
不搔菌 4～15 67.5 187.3
2.3 温度对原基形成的影响 由图1可见，处理Ⅲ（20～22℃；16～18℃）原基形成率最高，达到97%，处理Ⅰ（22～24℃；18～20℃）原基形成率不到40%，搔菌初期温度偏高，菌丝恢复较快，但现蕾期不易形成原基，且气生菌丝较多；温度偏低菌丝恢复慢，原基诱出期长，易导致后期霉菌污染。
图1 温度对原基形成的影响
2.4 不同光照时数对原基形成影响 由图2可见，菌丝恢复阶段进行光照，影响菌丝恢复和原基形成，而菌丝恢复后，增加光照有利原基的形成，如0h/24h，原基形成率达到98%，且转色快，抗杂菌污染能力强；如果现蕾期光照不足，原基转色慢，形成率降低，同时光照不足也影响后期产量和品质。
图2 不同光照时数对原基形成的影响
2.5 空气相对湿度对原基形成的影响 图3所示，处理c（97%～99%；89%～91%），原基形成率达98.3%，菌丝恢复期湿度接近饱和，可控制搔菌料面污染，但前提是料面不能有积水；而现蕾期，需控制湿度，以89%～91%最佳。通过控制两个阶段的湿度差，可明显提高原基形成率。而随着两个阶段的湿度同时降低，其突出表现是料面偏干，易导致原基形成前料面霉菌污染，原基形成受到影响。
图3 空气相对湿度对原基形成的影响
2.6 通风量对原基形成的影响 通气量达10min/10min时，灰树花原基形成率最高，测定其CO2浓度为1060mg/kg，而加大通气量，原基形成率有降低趋势（图4）。
灰树花是需氧最多的食用菌之一，通气不足或CO2浓度过高，菌丝生长细弱，分枝少，原基分化困难，开片难，畸形多，但通风过大，易出现栽培室湿度降低或不均，因此管理中要注意通风和保湿两者的矛盾[4]。
图4 通风量对原基形成的影响
3 小结与讨论
试验研究了工厂化袋栽灰树花培养期不同后熟期，搔菌刺激诱导出菇，搔菌后温度、湿度、光照和通风条件等因素对原基形成、产量等的影响。结果表明：菌丝发满袋后熟10～15d，袋壁割口搔菌诱导出菇，菌丝恢复期和现蕾期温度控制为：20～22℃；16～18℃，光照控制为：0h/24h，空气相对湿度控制为：97%～99%；89%～91%，通风量控制为：4min/10min；10min/10min，有利于原基的形成，这为灰树花工厂化袋栽奠定了基础。
参考文献
[1]郭家瑞，王卫国，李磊，等.灰树花研究概述[J]食用菌，2010（4）：1-2.
[2]郑永标，陈济琛，林新坚.食用菌子实体发生研究进展[J].食用菌学报，2003，10（1）：59-63.[3]潘辉，李正鹏，王瑞娟，等.灰树花子实体发育过程研究[J].食用菌，2010（5）：9-11.
[4]房玉洁，王冬梅，史秀娟.灰树花的生物学特性及高产栽培技术[J].中国果菜，2004（2）：18-20.
